Összefoglalás: A veleszületett süketség kb. 60%-ban genetikai okra vezethető vissza. A süketség genetikai szűrése ez idáig a vérből kivont DNS vizsgálatán alapult. A szájnyálkahártyáról vett kenetek genetikai vizsgálata kiváló alternatívát jelenthet az előbbi vérvizsgálat helyett a süketség szűrésében, különösen kisgyermekek esetén. Az eljárás alkalmazhatóságának bemutatására a Connexin-26 gén 35delG mutációjának kimutatását választottuk. 29 hallássérült kisgyermektől (1. csoport; életkor < 3 év) és 31, három évesnél idősebb hallássérült egyéntől (2. csoport) vért és buccalis kenetet vettünk genetikai vizsgálatra. Mindkét forrásból genomiális DNS-t izoláltunk, majd a DNS koncentrációját fotometriával meghatároztuk. A DNS mintákat polimeráz láncreakcióval végzett hely-specifikus mutagenezisnek vetettük alá, melyet BSI Y1 endo- nukleáz restrikció, majd elektroforézis követett. A vérminták és a buccalis kenetek vizsgálati eredményeit a 35delG mutáció meglétére illetve hiányára vonatkozóan összevetettük. Eredményeink azt mutatták, hogy mind a vérmintákból, mind a szájnyálkahártya-kenetekből megfelelő mennyiségű és minőségű DNS-t tudtunk izolálni. Az azonos forrásból kivont DNS mennyiségét tekintve a két csoport közt nem volt szignifikáns különbség. Az egyes betegek vérmintájának és a buccalis kenetének a 35delG mutációra vonatkozó lelete minden esetben azonos volt. A vizsgálati eredményekből arra következtetünk, hogy a szájnyálkahártya-kenet megbízható DNS forrás genetikai vizsgálatok számára, mely elkerülhetővé teszi a vérvételt hallásgenetikai szűrés esetén.
ABSTRACT: Congenital deafness is caused in approximately 60 % by genetic reasons. The genetic screening of deafness has so far been based on the analysis of DNA extracted from blood. Buccal smears may be an excellent alternative DNA source for the genetic screening of deafness, especially in case of young children. For the demonstration of the method’s feasibility we chose the detection of the 35delG mutation of the Connexin-26 gene. We drew blood and gathered buccal smears for genetic examination from 29 hearing impaired young children (Group 1, age < 3 years) and 31 hearing impaired older patients (Group 2, age >3 years). Genomic DNA was isolated from both sources and DNA concentration was measured by photometry. DNA samples were submitted to PCR mediated site-directed mutagenesis followed by treatment with restriction endonuclease BSI Y1 and electrophoresis. Results of the blood samples and buccal smears were compared concerning the presence of the 35delG mutation. Adequate amounts of good quality DNA could be isolated both from the blood samples and buccal smears. No significiant difference could be found between the two groups concerning DNA amounts isolated from the same source. 35delG detection results were identical in blood samples and buccal smears in the case of every patient. We conclude that buccal smears are a reliable DNA source for genetic examinations that can help to avoid drawing blood in the genetic screening of deafness.
A teljes tartalom elolvasásához bejelentkezés szükséges! Bejelentkezés